1、将切成块的土豆放入烧杯中煮半个小时，随即滤水备用，再将琼脂放入水中，然后把水烧开，待琼脂溶化后再煮一段时间，之后把汁液分放至试管中。
2、将试管放在高压锅中消毒，随即斜放试管，直至冷凉凝固。
3、对平菇消毒杀菌，然后切成小块，接种至基质上。
4、用塞子堵住试管口，再将基质放入培养箱中培养菌丝。
一、平菇菌种如何制作
1、一级菌种
（1）将土豆切成小块并放入烧杯中煮30多分钟，随即过滤出液体留作备用。
（2）将琼脂放入过滤出来的液体中，然后将其烧开，待琼脂完全溶化后再煮一段时间，之后把汁液分放到试管中，再放到高压锅内消毒杀菌。经过消毒后，将试管斜放，直到冷凉凝固后准备接种。
（3）用酒精清洗品相优良的嫩蘑菇，经过消毒后在无菌箱中将蘑菇切成小块，随即将其接种到琼脂基质上。接种时下面要放一个酒精灯，试管口要在酒精灯上方，尽量保证接种空间无菌。
（4）用塞子堵上试管口，再将琼脂基质放入培养箱中开始培养，待长满菌丝后即形成一级菌种。
2、二级菌种
（1）将大豆等谷粒煮熟，再放置于无菌的条件下晾干。
（2）玻璃瓶经高温杀菌后放入晾好的谷粒，并封口，然后将玻璃瓶放到高压锅内用高压进行灭菌，取出后放在无菌室冷凉。
（3）将培养瓶放到无菌箱里，再将一级菌种放进去，然后用专用的小匙挖出黄豆大小的菌种接种入玻璃瓶内，注意接种时下面要放一个酒精灯，试管口要在酒精灯上方，尽量保证接种空间无菌。
（4）接种后随即封口，最后将玻璃瓶放到培养室中培养菌种，待长满菌丝后即可备用。
3、三级菌种（生产用菌种）
（1）制备方法与二级菌种的制备方法基本相同，只是培养基通常要使用煮熟的玉米粒、麦粒、棉籽等物质。
（2）待三级菌种的菌丝长满后即可取出来种蘑菇。经历了三级菌种的培育后，平菇菌便已完全制作完成。
二、平菇菌种如何培育
1、准备材料
准备数个六成熟的鲜平菇，以及适量的土豆、琼脂粉、葡萄糖粉。
2、母种培养基配方
土豆200克（取汁），葡萄糖粉20克，琼脂20克左右，硫酸镁1.5克，磷酸二氢钾3克，蛋白胨3克，水1000毫升。
3、母种培养基制作过程
（1）将土豆去皮切片，放入1000毫升开水（水一定要够1000毫升，不够时需要补充）中煮半小时左右，煮熟后用纱布过滤取汁。
（2）将土豆汁倒入盛有其他配料的容器中，一边倒一边搅拌，直至拌匀。
4、装入试管
（1）把混合液吸入试管中，大约吸入试管长度的三分之一左右即可。
（2）用棉花把试管口塞紧，再把装好的试管用牛皮纸包裹，牛皮纸外用绳子捆绑，下部不要盖住便于以后操作观察。
（3）将绑好的试管放入高压锅中用高压消毒。
5、消毒
（1）消毒时间一般需要持续30分钟左右，期间高压锅的温度要控制在120℃左右。
（2）取出试管后趁热倾斜放置，以便试管中的液体凝固后有一个斜面，这样利于菌丝的生长。
6、接种
（1）用小刀将新鲜的平菇切去中间一小块，然后放入试管中培养，注意整个过程都要在无菌的环境下操作，而且整个器械都要用75%的酒精进行消毒。
（2）将试管放入保温箱，温度保持在25℃，经过10天左右便可培育出平菇菌母种。